产品货号:
WH0114
中文名称:
粪便基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)
英文名称:
Magnetic Stool DNA Extraction Kit
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用独特的缓冲液系统,适用于粪便样本以及肠道微生物的提取。使用本试剂盒回收的DNA杂质少,完整性好,可直接用于PCR、酶切等分子生物学下游实验。
- 操作便捷:能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
- DNA纯度高:与磁珠法纯化相结合,提取的DNA纯度高,可直接用于下游实验。
组分 | 50次 | 200次 |
缓冲液SA | 45mL | 120mL |
缓冲液SC | 5mL | 25mL |
缓冲液SH | 10mL | 45mL |
缓冲液GFA | 10mL | 30mL |
去蛋白液RD | 24mL | 90mL |
漂洗液PWD | 20mL | 2×40mL |
洗脱缓冲液TB | 15mL | 30mL |
1mm研磨珠 | 15g | 60g |
磁珠悬浮液G | 0.5mL | 2×1mL |
保存:室温干燥,有效期1年。
更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
- 新采取的样本会得到更高的得率,不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
- 在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀,否则会影响产物纯度。
- 缓冲液GFA、去蛋白液RD和漂洗液PWD使用前请参照瓶上标签加入相应的醇。
- 过量的DNA可能抑制下游PCR反应,遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后使用。
- 使用前检查缓冲液SC是否有沉淀,若有沉淀,请在37℃加热至完全溶解后使用。
- 粪便样本中可能有RNA残留,如果需要去除RNA,需自备RNase A溶液(货号:WH0217)。
使用前请先在缓冲液GFA中加入异丙醇;在去蛋白液RD和漂洗液PWD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签。
- 样本处理
在2mL离心管中加入样本0.25~0.5g,如果是液态样本则转移200μL至离心管中,加入500μL缓冲液SA、100μL缓冲液SC和0.25g研磨珠,(粪便样本可能有RNA残留,如需去除RNA,建议再加入10μL RNase A)涡旋振荡混匀后70℃加热裂解15min提高裂解效率。12000rpm(~13400g)离心1min,转移上清液(约500μL)至新的2mL离心管。- 对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可将温度提高至95℃以促进裂解。
- 加入200μL缓冲液SH混匀,涡旋5sec,4℃放置10min。
- 12000rpm (~13400×g)离心3min,转移上清液至新的2mL离心管,加入500μL缓冲液GFA(使用前请先检查是否已加入异丙醇),颠倒混匀。
- 转移上清时不要移走沉淀,否则可能降低DNA纯度。
- 加入10μL磁珠悬浮液G,振荡混匀5min。
- 为了确保磁珠彻底重悬,请在使用前振荡混匀。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
- 将离心管从磁力架上取下,加入700μL去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀5min。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
- 将离心管从磁力架上取下,加入700μL漂洗液PWD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀3min。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
- 重复步骤8和9一次。
- 将离心管于磁力架上,室温晾干5~10min。
- 乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA。
- 将离心管从磁力架上取下,加入50~100μL洗脱缓冲液TB,振荡混匀,置于56℃,孵育5min,期间震荡混匀3回,每回3~5次。
- 将离心管放置于磁力架上静置2min,磁珠完全吸附后,小心将DNA溶液转移至一个新离心管中,并于适当条件保存。
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